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    當前位置:首頁 > 技術文章 > Cytoskeleton PHDG1-A說明書

    Cytoskeleton PHDG1-A說明書

    更新時間:2018-08-17      點擊次數:3060

     

    Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號轉導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產品。我們專注于生產純化蛋白質和易于使用的試劑盒,以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品CytoDYNAMIX Screens™)。

    除了我們現有的產品,我們還在產品線中為微管,微管蛋白,運動蛋白,小G蛋白效應物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。

    Acti-stain 488 phalloidin  Acti-stain 488鬼筆環肽

     

    (Cat. # PHDG1-A)   300 Slides

    產品用途包括

    · 固定組織切片和組織培養細胞制劑中肌動蛋白絲的熒光染色。  注意:與許多肌動蛋白抗體不同,Acti-stain™488鬼筆環肽僅與F-肌動蛋白結合,導致低背景熒光。此外,通過Acti染色結合F-肌動蛋白在物種之間沒有明顯差異。

    · 體外穩定熒光肌動蛋白絲的制備。

     

    肌動蛋白染色在確定活細胞和固定細胞中細胞骨架的結構和功能方面非常有用。肌動蛋白細胞骨架在活細胞中是非常動態和不穩定的結構,但是在探測或染色肌動蛋白結構之前可以用多聚甲醛固定。 

     

    材料

    鬼筆環肽是來自蘑菇傘形毒蕈的七氨基酸肽毒素,其特異性地并且以高親和力(Kd 20nM)結合至肌動蛋白的聚合形式(F-肌動蛋白)。鬼筆環肽將肌動蛋白聚合的臨界濃度降低至小于1μg/ ml,從而充當聚合增強劑。鬼筆環肽已經用專有的綠色熒光染料標記,使其可用于染色組織培養細胞和組織切片中的肌動蛋白絲(1,參見圖1)和無細胞制劑。Acti-stain™488鬼筆環肽標記的肌動蛋白絲保留了未標記肌動蛋白的許多功能特征,包括它們與肌球蛋白相互作用的能力。Actin-stain TM 488鬼筆環肽以橙色固體形式提供。 

    注意:鬼筆環肽是有毒的,必須小心處理(LD50人= 2mg / Kg)。

     

     

    示例結果和規格

     

     

    圖1.在瑞士3T3細胞中用Acti-stain TM 488染色的肌動蛋白應力纖維。

     

    圖2. Acti-stain™鬼筆環肽的發射和激發掃描

     

     

     

     

     

     

     

    用抗 - 紐蛋白(紅色),Dapi(藍色細胞核)和F-肌動蛋白染色的Swiss 3T3細胞用Acti-stain TM 488(綠色F-肌動蛋白,Cat。#PHDG1)染色。

     

    Acti-stain TM 488的吸光度和熒光掃描。將標記的鬼筆環肽稀釋到甲醇中,并分別在350-750和500-750nm之間掃描其吸光度和激發光譜。吸光度峰值在500nm處,熒光在550nm處。

     

    Acti-stain鬼筆環肽是可用的明顯的鬼筆環肽。表1描述了它們對F-肌動蛋白的亮度,光穩定性,背景和親和力常數。將這些性能特征與其他熒光鬼筆環肽進行比較,您將看到使用Acti-stain™來滿足肌動蛋白染色要求的優勢。

    表1.熒光鬼筆環肽的生物化學特征

    共軛

    貨號

    波長(Ex / Em)

    亮度(AFU *)

    光漂白的穩定性(以秒為單位的半衰期**)

    背景 (總AFU在100nM時的百分比**)

    親和力(Kd,納摩爾)

    熒光毒傘素

    na

    485/535 FITC濾波器組

    432

    6

    22

    72 +/- 12

    Acti-stain™488

    PHDG1

    485/535 FITC濾波器組

    832

    57

    55 +/- 8

    Acti-stain™535

    PHDR1

    535/585 TRITC濾波器組

    430

    27

    12

    36 +/- 7

    Acti-stain™555

    PHDH1

    535/585 TRITC濾波器組

    551

    46

    16

    63 +/- 8

    Acti-stain™670

    PHDN1

    640/680 Cy5濾光片組

    332

    8

    18

    50 +/- 12

    * = AFU通過定量細胞成像測量。** =在沒有抗褪色的情況下在染色的Swiss 3T3細胞中測量。

     

    引用:

    oitbak等,2011。微小RNA在神經干細胞支持內皮形態發生中的作用。血管細胞v 3,p 25。

     

    Yuan et al。,2012。使用同量異位標簽對胺代謝物進行亞秒級絕dui定量,以發現哺乳動物細胞中的通路活化。肛門。化學第84頁,第2892-2899頁。

     

    問題1:我可以使用熒光標記的鬼筆環肽染色活細胞中的F-肌動蛋白嗎?

    答案1:  不幸的是,不,鬼筆環肽不能用于在活細胞中染色F-肌動蛋白。鬼筆環肽用于在固定細胞中染色F-肌動蛋白。熒光鬼筆環肽僅與F-肌動蛋白的天然四級結構結合,提供低背景。鬼筆環肽結合的正確固定條件是在PBS中的3.7%(v / v)多聚甲醛10分鐘,因為它保留了鬼筆環肽的高親和力結合所必需的季銨蛋白結構。甲醇固定破壞天然構象,因此不適合用鬼筆環肽染色F-肌動蛋白。為了監測活細胞中的肌動蛋白動力學,建議微量注射羅丹明標記的肌動蛋白(Cat。#APHR或AR05)。有關更多信息,請參閱這些數據表。

     

    問題2:哪種熒光標記的鬼筆環肽穩定/亮?

    答案2:  Acti-stains中亮和穩定的是Acti-stain 488(綠色熒光; Cat。#PHDG1)。有關我們所有Acti-stains的更多信息,請參閱下表。 

    共軛

    貓。#

    波長(Ex / EM)

    亮度(AFU)

    光漂白的穩定性*(1/2秒壽命)

    背景(總AFU在100 nM時的百分比)

    Acti-stain™488

    PHDG1

    535分之485

    832

    57

    Acti-stain™535

    PHDR1

    585分之535

    430

    27

    12

    Acti-stain™555

    PHDH1

    585分之535

    551

    46

    16

    Acti-stain™670

    PHDN1

    六百八十零分之六百四十

    332

    8

    18

    * =在沒有抗褪色的情況下測量。

     

     

    貨號

    品名

    規格

    品牌

    BK165-S

    Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK165

    Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK163-S

    Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK163

    Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK160-S

    Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK160

    Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK162-S

    Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK162

    Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK161-S

    Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK161

    Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    AAC04-Beads

    Acetyl-Lysine Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    APY03-Beads

    Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    ASM11-Beads

    SUMOylation 1 Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    ASM24-Beads

    SUMOylation 2/3 Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    UBA01-Beads

    Ubiquitination Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    CIG02-Beads

    Acetyl-Lysine Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    CIG03-Beads

    SUMO1 IP Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    CIG01-Beads

    IgG Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    CUB02-Beads

    Ubiquitination Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    BLR01

    BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

    ea

    cytoskeleton

    BLR02

    BlastR™ Rapid Filtration Kit

    ea

    cytoskeleton

    AAC02

    Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

    ea

    cytoskeleton

    AAC03

    Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

    ea

    cytoskeleton

    AAC03-HRP

    Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

    ea

    cytoskeleton

    AAC01

    Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

    ea

    cytoskeleton

    APY03

    Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

    ea

    cytoskeleton

    APY03-HRP

    Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

    ea

    cytoskeleton

    ASM01

    SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

    ea

    cytoskeleton

    ASM24

    SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

    ea

    cytoskeleton

    ASM23

    SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

    ea

    cytoskeleton

    ASM23-HRP

    SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

    ea

    cytoskeleton

    AUB01

    Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

    ea

    cytoskeleton

    AUB01-HRP

    Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

    ea

    cytoskeleton

    PHDG1

    Acti-stain 488 phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    PHDH1

    Acti-stain 555 phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    PHDN1

    Acti-stain 670 phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    BK001

    Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

    ea

    cytoskeleton

    BK003

    Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

    ea

    cytoskeleton

    AKL95

    Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AD99

    Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

    ea

    cytoskeleton

    AS99

    Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

    ea

    cytoskeleton

    AKL99

    Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AKF99

    Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AP05

    Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    APHR

    Actin protein (rhodamine): human platelet

    ea

    cytoskeleton

    AR05

    Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AT01

    Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    RP01P

    Arp2/3 protein complex: porcine brain

    ea

    cytoskeleton

    CS-TFC01

    Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

    ea

    cytoskeleton

    CF01

    Cofilin 1 protein: human recombinant

    ea

    cytoskeleton

    HPG6

    Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

    ea

    cytoskeleton

    MH01

    Heavy meromyosin protein

    ea

    cytoskeleton

    CS-MH03

    Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

    ea

    cytoskeleton

    CS-MYS03

    Myosin - cardiac S1 fragment

    ea

    cytoskeleton

    CS-MYS04

    Myosin - skeletal muscle S1 fragment

    ea

    cytoskeleton

    CS-MYS05

    Myosin - smooth muscle S1 fragment

    ea

    cytoskeleton

    MY02

    Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    MY03

    Myosin protein: bovine cardiac muscle

    ea

    cytoskeleton

    PR02

    Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

    ea

    cytoskeleton

    PHDR1

    Rhodamine Phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    CY-SC001

    SiR-Actin Kit

    ea

    cytoskeleton

    CY-SC013

    SiR700-Actin Kit

    ea

    cytoskeleton

    VCG03

    WASP protein VCA domain: GST tagged: human

    ea

    cytoskeleton

     

     

     

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