sinobiological STF02說明書

Sinofection Transfection Reagent

Cat: STF02

中轉(zhuǎn)簡介

Sinofection是一種基于陽離子聚合物的優(yōu)異轉(zhuǎn)染試劑。它已成功應用于各種細胞系的各種規(guī)模的轉(zhuǎn)染。與市場上*的轉(zhuǎn)染試劑相比，Sinfection具有更高的蛋白表達水平和更低的細胞毒性。它是用于瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的重組蛋白生產(chǎn)的理想選擇。它與血清，細胞類型，規(guī)模和儲存溫度的廣泛兼容性為您提供了研究和生產(chǎn)的便捷和保證。

特征

• 出色的蛋白質(zhì)表達
• 粘附細胞和懸浮細胞的出色轉(zhuǎn)染，可用于多種細胞系
• 從微量滴定板到生物反應器，DNA轉(zhuǎn)染（瞬時/穩(wěn)定）的顯著應用
• 簡單快速的程序
• 低細胞毒性

-優(yōu)質(zhì)的蛋白表達

事實證明，與*競爭對手的產(chǎn)品相比，Sinfection的轉(zhuǎn)染可在多種細胞系中提供更高水平的蛋白質(zhì)表達。對于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白，Sinfection是實現(xiàn)適產(chǎn)量的宜選擇。此外，Sinfection還具有很高的轉(zhuǎn)染效率，可確保成功進行轉(zhuǎn)染。

圖1在9個細胞系中比較了使用Sinfection和其他競爭者進行瞬時轉(zhuǎn)染的蛋白表達水平，其中6個顯示出被Sinfection（A?F）轉(zhuǎn)染的優(yōu)異結(jié)果。通過ELISA測定法確定蛋白質(zhì)表達水平。競爭對手轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染遵循制造商的規(guī)程。

-貼壁細胞和懸浮細胞的出色轉(zhuǎn)染，適用于多種細胞系

-從微量滴定板到生物反應器的規(guī)模上，DNA轉(zhuǎn)染（瞬時/穩(wěn)定）的顯著應用

通過Sinfection在96孔板中的0.1mL到生物反應器中的50L的各種規(guī)模的瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，已經(jīng)成功表達了數(shù)百種重組抗體和蛋白質(zhì)。在所有規(guī)模的轉(zhuǎn)染應用中使用Sinofection，將在很大程度上節(jié)省研究和生產(chǎn)成本。

-操作簡便快捷

1，轉(zhuǎn)染規(guī)程（35mm培養(yǎng)皿）：

（1）細胞的制備

• 貼壁細胞
  • 轉(zhuǎn)染前一天，每35毫米培養(yǎng)皿將0.2–2×10 6個細胞置于培養(yǎng)基中。在37°C（5％CO 2）下孵育過夜。轉(zhuǎn)染前細胞的融合度應為50–80％。
• 懸浮細胞
  • 在35毫米培養(yǎng)皿中以5×10 4 / mL到1×10 6 / mL 的密度將2 mL新鮮傳代的細胞平板接種。轉(zhuǎn)染時，懸浮細胞應處于對數(shù)生長期。在37°C（5％CO 2）下孵育細胞過夜。細胞數(shù)取決于您的需要和要轉(zhuǎn)染的細胞類型。

（2）Sinfection＆DNA復合物的制備

用適當?shù)南♂寗ㄈ鏟BS，NaCl溶液，葡萄糖溶液，DMEM，有或無血清的等滲溶液）稀釋DNA，以等滲形式稀釋至濃度為20μg/ mL（建議優(yōu)化），總體積為250μL。

在250μL培養(yǎng)基中稀釋適量的Sinofection。

將稀釋的DNA與稀釋的Sinofection混合（總體積= 500μL）。輕輕混合并在室溫下孵育20分鐘（溶液可能看起來混濁）。

（3）轉(zhuǎn)染

將500μL復合物逐滴添加至細胞和培養(yǎng)基中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或孔，以確保均勻分布。

在蛋白質(zhì)表達測定之前，將細胞在37°C的CO 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-48小時（通常在72小時后達到高表達）。

2，轉(zhuǎn)染方案（瓶）：

轉(zhuǎn)染細胞以表達蛋白質(zhì)此協(xié)議通常用于將DNA轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)在燒瓶中的293 EBNA或CHO細胞中。使用前使用無菌DNA或?qū)NA進行過濾滅菌（過濾后重新定量DNA）。

所有量均以每瓶為基礎，在125 mL搖瓶中培養(yǎng)30 mL；有關其他格式，請參見表2。按比例放大或縮小轉(zhuǎn)染。

表2.使用Sinfection擴大或縮小轉(zhuǎn)染。注意：實際條件應通過實驗優(yōu)化。

1. 以0.3×10 5細胞/ mL的速率通過293細胞，以175 rpm的速度搖動。72小時后，將細胞稀釋至1.0×10 6細胞/ mL，以175 rpm搖動。4小時后轉(zhuǎn)染。
2. 以0.3×10 5細胞/ mL的速度通過CHO細胞，以175 rpm的速度搖動。48小時后，將細胞稀釋至1.0×10 6細胞/ mL，以175 rpm搖動。4小時后轉(zhuǎn)染。
3. 用適當?shù)南♂寗ɡ绾琈g 2+的 PBS ，150 mM NaCl，300 mM葡萄糖，有或無血清的DMEM培養(yǎng)基）稀釋稀釋所需的質(zhì)粒DNA量。在室溫下孵育5分鐘。將所需的Sinfection體積添加到稀釋的DNA中，并輕輕混合以確保總體積為1.5?3 mL。
4. 在室溫下將混合物孵育10-20分鐘，以形成復合物。孵育時間不要超過20分鐘。
5. 向裝有細胞的125mL燒瓶中緩慢加入1.5?3 mL DNA-脂質(zhì)混合物，同時緩慢搖動燒瓶。
6. 對于293細胞和CHO細胞，將轉(zhuǎn)染的細胞培養(yǎng)物在設置為175 rpm的定軌振蕩器上于37°C，8％CO 2孵育。

-低細胞毒性

Sinofection顯示出極低的細胞毒性，該毒性已通過內(nèi)部WST-8測定法針對每批進行測試和驗證。WST-8測定基于線粒體脫氫酶對水溶性四氮唑（WST）的比色還原

甲dye染料溶液的吸光度與活細胞數(shù)成正比。與常用的WST-1方法相比，WST-8測定的靈敏度更高，而甲dye染料的溶解度和穩(wěn)定性更好。

圖3.分別用L2K和Sinfection轉(zhuǎn)染的HeLa細胞和DG44細胞的顯微鏡比較。按照制造商的建議進行轉(zhuǎn)染。

圖4. Sinofection和L2K對4種細胞系的細胞毒性比較。按照制造商的建議進行轉(zhuǎn)染。

質(zhì)量控制

• 轉(zhuǎn)染效率：
  • Sinofection已針對293E細胞株進行了大量測試，以確保一致性和有效性。使用2.8μL的Sinofection，用0.6μg的rhFc表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24孔板中的85％融合293E細胞。
• 無菌性：
  • Sinofection在無菌條件下生產(chǎn)和包裝，并通過0.22μm無菌過濾器過濾，用于后一步。
• 細胞毒性：
  • 通過內(nèi)部WST-8分析評估Sinfection的細胞毒性。

使用指南

• 應用：
  • 重組蛋白/抗體的表達與純化
  • 功能基因研究
  • 功能蛋白研究
  • 基因治療
  • 轉(zhuǎn)基因動物模型
• 存儲：
  • Sinofection可以在2℃-8℃下保存兩個月，而沒有發(fā)現(xiàn)活性下降。抗體產(chǎn)品自收到之日起在-20℃至-70℃下保存可穩(wěn)定十二個月。耐受凍融循環(huán)。