jetPRIME ^®

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轉(zhuǎn)染效率

jetPRIME ^®是一種適用于日常實(shí)驗(yàn)的強(qiáng)大轉(zhuǎn)染試劑。它導(dǎo)致各種來(lái)源的轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞系以及原代細(xì)胞的比例異常高。

 與競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的試劑相比，使用 jetPRIME ^®試劑獲得了 70% 至 90% 的轉(zhuǎn)染效率（圖 1 和圖 2）。

圖 1：jetPRIME 與其主要競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的轉(zhuǎn)染效率比較。在 24 孔板中轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)，通過(guò) FACS 分析在各種細(xì)胞系中評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。根據(jù)制造商對(duì) Lipofectamine ^® 2000 和 jetPRIME ^®的推薦使用條件。

圖 2：jetPRIME ^®與 Lipofectamine ^® 3000 的轉(zhuǎn)染效率比較。在 96 孔板或 24 孔板中轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)，通過(guò) FACS 分析在各種細(xì)胞系中評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。根據(jù)制造商對(duì) lipofectamine ^® 3000 和 jetPRIME ^®的推薦使用條件。

成本效益：更少的 DNA 和更少的試劑

jetPRIME ^® 是一種強(qiáng)大的體外轉(zhuǎn)染試劑，需要少量試劑和質(zhì)粒 DNA，因此使用起來(lái)非常經(jīng)濟(jì)高效 （表 1）。

表 1：推薦使用條件。根據(jù)制造商的建議，用于轉(zhuǎn)染的 6 孔板中每孔 DNA 和試劑（jetPRIME ^®和競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手）的數(shù)量。

除了降低成本之外，使用更少的 DNA 還可以最大限度地減少轉(zhuǎn)染引發(fā)的不利細(xì)胞毒性作用。因此，jetPRIME ^® 是實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率和出色細(xì)胞活力的試劑。

更好的細(xì)胞活力

jetPRIME ^® 在轉(zhuǎn)染過(guò)程中對(duì)細(xì)胞極其溫和，從而提高細(xì)胞活力并改善轉(zhuǎn)染結(jié)果。用 jetPRIME ^®轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 是健康的，而競(jìng)爭(zhēng)者則觀察到主要的細(xì)胞毒性（圖 3）。

圖 3：轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)的細(xì)胞活力。根據(jù)制造商對(duì)每種試劑的建議，在轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)對(duì) HeLa 細(xì)胞進(jìn)行相差顯微鏡檢查。

易于使用的協(xié)議

jetPRIME ^® 是一種易于使用的轉(zhuǎn)染試劑（圖 4）：

• 快速且輕松地?cái)U(kuò)大和縮小規(guī)模
• 與血清和抗生素兼容

圖 4：jetPRIME ^®協(xié)議。方便的 DNA、siRNA 和 DNA 和 siRNA 共轉(zhuǎn)染方案。

在我們的博客部分查看我們的 專(zhuān)家提示，以加快 DNA 轉(zhuǎn)染。

應(yīng)用

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

jetPRIME ^®導(dǎo)致各種來(lái)源的轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞系以及原代細(xì)胞的比例非常高（表 1）。

表 1：使用 jetPRIME ^®的各種細(xì)胞類(lèi)型的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)通過(guò) FACS 分析確定 GFP 陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。

質(zhì)粒是在細(xì)菌中常見(jiàn)的環(huán)狀 DNA 小分子。質(zhì)粒與染色體 DNA 分開(kāi)存在和復(fù)制，并且在細(xì)菌中它們通常攜帶有利于細(xì)菌生存的基因。質(zhì)粒可被有意引入所需細(xì)胞并用于在特定細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)感興趣的基因。此過(guò)程稱(chēng)為 DNA 轉(zhuǎn)染，是研究基因功能或目標(biāo)蛋白質(zhì)的常用方法。

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基因組編輯

CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的使用最近成為一種在特定位點(diǎn)修改細(xì)胞基因組的非常方便的方法。它涉及將 (a) 一個(gè)或多個(gè)編碼 Cas9、特定 gRNA 和最終插入序列的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，或 (b) 一個(gè)或兩個(gè)質(zhì)粒和一個(gè) RNA 分子（gRNA）的混合物.

可用應(yīng)用說(shuō)明： 使用 jetPRIME ^{® 進(jìn)行}CRISPR/Cas9 介導(dǎo)的基因破壞。

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siRNA轉(zhuǎn)染

jetPRIME ^® 導(dǎo)致多種細(xì)胞系中內(nèi)源基因表達(dá)的抑制率超過(guò) 90%。例如，jetPRIME ^®介導(dǎo)的HeLa 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與10 nM siRNA 雙鏈體靶向HeLa 細(xì)胞中的內(nèi)源性核纖層蛋白A/C 顯著降低了核纖層蛋白A/C 基因的表達(dá)水平（圖1）。

圖 1：使用 jetPRIME ^{® 的}內(nèi)源性 lamin A/C 靜音。用 10 nM 的 21-mer 核纖層蛋白 A/C siRNA 轉(zhuǎn)染 HeLa 細(xì)胞。48 小時(shí)后，使用抗 lamin A/C 抗體通過(guò)免疫熒光顯微鏡評(píng)估 lamin A/C 沉默。

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不同核酸的共轉(zhuǎn)染

jetPRIME ^® 非常適用于 DNA 和 siRNA/miRNA共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)或多種 DNA 質(zhì)粒的共遞送。

我們使用 jetPRIME ^®進(jìn)行了 DNA 和 siRNA 遞送，并在各種細(xì)胞系中觀察到高效的基因沉默且毒性極低。使用 10 nM siRNA 在貼壁細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了超過(guò) 90% 的沉默（圖 2）。

圖 2：使用 jetPRIME ^{® 共}轉(zhuǎn)染 DNA 和 siRNA 后，幾種細(xì)胞系中的外源熒光素酶沉默。在 6 孔板中，每孔使用 400 ng p4CMV-Luc 和 10 nM 熒光素酶 siRNA 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

質(zhì)量

每批 jetPRIME ^®試劑都通過(guò)用表達(dá) GFP 的質(zhì)粒對(duì) HeLa 細(xì)胞進(jìn)行 DNA 轉(zhuǎn)染進(jìn)行內(nèi)部測(cè)試，并且每瓶試劑都提供分析證書(shū)。