上海起發biodynamics DS410說明書

DynaCompetent® Cells IS-mutation Safe

本產品以DH5α為原株，在大腸桿菌基因組中ISs之間的IS2、IS5、IS10、ISEc63（相似序列）的轉座酶翻譯區使用Target-AID®終止密碼子。 大腸桿菌感受態細胞* 1

* 1雖然 IS 的活性降低，但不保證 IS 不會轉移。

確認 IS 插入

質粒的頻率降低 用耐氨芐青霉s質粒 (30 kb, pUC Ori) 轉化本產品和大腸桿菌 DH5α 菌株后，進行 24 小時液體培養，最多進行 6 次繼代培養。在上述每次培養過程中純化質粒，

并使用HiSeq進行下一代測序以估計插入IS * 2 * 3, 4的質粒的大致比例。

該產品抑制了 IS 插入 DH5α 菌株的質粒。

* 2 IS：IS1、IS2、IS3、IS4、IS5、IS10、IS30、ISEc5、IS609、ISEc63的總數。

* 3 DH5α菌株在+6次傳代培養時計算為超過100%，這表明兩個或多個IS插入到一個質粒中。

* 4單獨將相同質粒插入DH5α菌株，傳代6次后分離出9個克隆，進行Sanger測序，證實了高IS插入率。

上述質粒用BamHI消化并進行瓊脂糖凝膠電泳。該質粒中有2個BamHI位點，原本產生2個條帶，但通過重復傳代次數確認了在DH5α株中條帶模式發生了變化。建議將 IS 插入質粒。另一方面，用該產物傳代的質粒抑制了條帶模式的變化。

DH5α

GFP 熒光在 48.6% 的菌落中消失或減弱

IS-突變安全

GFP 熒光沒有消失或衰減（沒有 IS 插入）*5

將該產物和大腸桿菌DH5α菌株用具有在lac啟動子控制下的GFP的質粒（不同于上述“減少的IS插入質粒"圖和遷移圖的質粒）轉化。將得到的菌落液體培養18小時，再傳代6次。繼代培養后，將培養液涂布在LB平板上培養過夜。在獲得的菌落中觀察到GFP的熒光。

結果，在DH5α中出現的48.6%的菌落中，GFP的熒光消失或減弱，但在該產物中，沒有確認其中GFP的熒光消失或減弱的菌落。當從DH5α菌株中GFP熒光消失或減弱的菌落中提取質粒并測序時，所有克隆均在lac啟動子，或DNA型轉座因子IS2或在lac啟動子與GFP基因之間插入IS10L。

另一方面，在該產品和來自熒光DH5α菌落的質粒中，從lac啟動子到GFP的區域被完整地保留。

通過繼代培養，DH5α產生了質粒因插入IS而受損的克隆，但證實該產物抑制了IS對質粒的損傷。

* 5使用本產品，即使是完整的質粒，在 LB 板上觀察到的 GFP 的熒光強度也低于 DH5α 的熒光強度（它具有可見熒光）。在該產品中，在 lac 啟動子控制下的 GFP 的表達水平可能低于 DH5α。然而，質粒被克隆和純化沒有任何問題。

• 轉化效率：> 1 x 10 8 CFU / μg (pUC19)

• 附有 10 × 1 ml SOC 培養基

• 不適用于卡塔赫納法規