支原體是小的原核生物，它們太小而無(wú)法在顯微鏡下看到，并且不能被普通抗生素試劑消除。支原體可能會(huì)影響細(xì)胞系的細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和形態(tài)，從而可能導(dǎo)致不可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。大約 15% 到 35% 的實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染。因此，建議經(jīng)常控制以保證無(wú)支原體的環(huán)境。 

分析方法

CLS 提供支原體檢測(cè)的短期和長(zhǎng)期測(cè)試。在前者中，樣品在到達(dá)后立即進(jìn)行測(cè)試，而在后者中，開(kāi)始細(xì)胞培養(yǎng)并在無(wú)抗生素培養(yǎng) 14 天后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試。支原體檢測(cè)是使用兩點(diǎn)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行的，該系統(tǒng)包括 PlasmoTest™ - 支原體檢測(cè)試劑盒 (Invivogen) 和 Certus QC - mycoADVANCED 檢測(cè)試劑盒 (Certus)。

比色報(bào)告基因測(cè)定

該測(cè)試是基于細(xì)胞的比色測(cè)定。在支原體存在的情況下，報(bào)告細(xì)胞系會(huì)誘導(dǎo)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而觸發(fā)培養(yǎng)基中的顏色從紅色變?yōu)樗{(lán)色。該測(cè)定在 96 孔多孔板中進(jìn)行。在微孔板分光光度計(jì)中檢測(cè) 620-655 nm 的信號(hào)。檢測(cè)到所有支原體和膽原體物種，以及細(xì)胞培養(yǎng)物中的其他污染物，例如細(xì)菌。結(jié)果顯示在下面的條形圖中：

等溫?cái)U(kuò)增

等溫?cái)U(kuò)增是一種基于支原體特異性 DNA 的等溫?cái)U(kuò)增與使用 DNA 嵌入染料的實(shí)時(shí)檢測(cè)相結(jié)合的快速且可靠的測(cè)試。該測(cè)定法可以檢測(cè)出占污染 >95% 的六種常見(jiàn)的物種：口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌、發(fā)酵分枝桿菌、人型分枝桿菌和萊氏分枝桿菌。由于序列同源性，還將檢測(cè)到其他支原體物種（肺炎支原體、雞毒支原體和滑膜支原體）。為了確定樣品是支原體陽(yáng)性還是陰性，需要研究解鏈溫度 (Tm)。不同熔化溫度的結(jié)果如下所示： 

等溫?cái)U(kuò)增結(jié)果的評(píng)估

所有熔化溫度及其各自的測(cè)試結(jié)果解釋如下：

比色報(bào)告分析結(jié)果的評(píng)估

如果測(cè)試呈陽(yáng)性，則存在 5*10 2 – 5*10 5范圍內(nèi)的菌落形成單位 (CFU) 。不同支原體種類(lèi)的 CFU/ml 詳細(xì)列表如下所示：