Rapid GolgiStain™ Kit中文說(shuō)明書

 一、基礎(chǔ)信息

- 貨號(hào)：PK401  

- 英文名稱：Rapid GolgiStain™ Kit  

- 中文名稱：快速高爾基染色試劑盒  

- 規(guī)格：kit 

  本試劑盒為科研級(jí)產(chǎn)品，包含染色全流程所需試劑及耗材，適用于哺乳動(dòng)物腦組織切片、原代神經(jīng)元培養(yǎng)及細(xì)胞爬片的高爾基體染色。具體組分包括固定液、染色液A、染色液B、顯色底物、洗滌緩沖液及封片劑，可滿足30-50次實(shí)驗(yàn)需求。  

- 品牌：FD Neuroo Technologies  

- 適用領(lǐng)域：神經(jīng)科學(xué)、藥物研發(fā)及發(fā)育生物學(xué)研究，專用于神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的高爾基體形態(tài)學(xué)分析。  

 二、產(chǎn)品概述  

Rapid GolgiStain™ Kit 是基于改良Golgi-Cox技術(shù)的創(chuàng)新性染色試劑盒，旨在解決傳統(tǒng)高爾基染色法耗時(shí)長(zhǎng)、操作復(fù)雜、染色率低等痛點(diǎn)。通過(guò)優(yōu)化試劑配方與工藝流程，本產(chǎn)品將染色周期縮短至1.5-2小時(shí)（傳統(tǒng)方法需6-8小時(shí)），同時(shí)顯著提升染色特異性與信號(hào)穩(wěn)定性。其核心優(yōu)勢(shì)包括：  

1. 快速高效：全流程僅需1.5-2小時(shí)，支持高通量樣本處理。  

2. 高靈敏度：可清晰顯示直徑≥5μm的神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)，樹(shù)突棘分辨率達(dá)0.2μm。  

3. 兼容性廣：適用于冷凍切片、振動(dòng)切片、原代神經(jīng)元培養(yǎng)及細(xì)胞爬片。  

4. 穩(wěn)定性強(qiáng)：染色結(jié)果在避光條件下可保存6個(gè)月，無(wú)褪色或背景干擾。  

5. 安全性優(yōu)化：采用低毒試劑配方，操作安全性顯著提升。  

 三、成分組成與技術(shù)參數(shù)  

 1. 試劑組分  

- 固定液：由4%多聚甲醛與0.2%戊二醛組成的混合溶液，用于快速固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，防止高爾基體形態(tài)降解。  

- 染色液A：含銀氨絡(luò)合物與氧化劑，選擇性沉積銀顆粒于高爾基體膜表面，增強(qiáng)結(jié)構(gòu)對(duì)比度。  

- 染色液B：含還原劑（如對(duì)苯二酚）與穩(wěn)定劑，催化銀離子還原為金屬銀，形成高分辨率黑色沉淀。  

- 顯色底物：含鎳鹽與緩沖體系，優(yōu)化顯色反應(yīng)速率與終點(diǎn)控制。  

- 洗滌緩沖液：pH 7.4磷酸鹽緩沖液（PBS），用于去除未結(jié)合試劑，減少背景干擾。  

- 封片劑：含抗熒光淬滅劑的甘油凝膠，適用于長(zhǎng)期顯微鏡觀察。  

 2. 技術(shù)參數(shù)  

- 染色時(shí)間：  

  - 固定：15分鐘（室溫避光）。  

  - 染色：45分鐘（避光）。  

  - 顯色：10分鐘（避光）。  

- 樣本兼容性：  

  - 腦組織切片：厚度50-100μm，推薦使用振動(dòng)切片機(jī)或冷凍切片機(jī)制備。  

  - 原代神經(jīng)元培養(yǎng)：培養(yǎng)3-7天的神經(jīng)元，貼壁狀態(tài)良好。  

  - 細(xì)胞爬片：需經(jīng)多聚賴氨酸預(yù)處理以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁。  

- 檢測(cè)靈敏度：  

  - 高爾基體結(jié)構(gòu)：可檢測(cè)直徑≥5μm的完整結(jié)構(gòu)。  

  - 樹(shù)突棘：分辨率達(dá)0.2μm，支持單細(xì)胞水平分析。  

- 保存條件：  

  - 試劑：2-8℃避光保存，避免冷凍，有效期12個(gè)月。  

  - 封片劑：-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。  

 四、使用方法  

 1. 樣本制備  

- 腦組織切片：  

  1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)深度麻醉后快速取腦，避免機(jī)械損傷。  

  2. 用預(yù)冷PBS沖洗表面血液，轉(zhuǎn)移至含固定液的容器中，室溫固定15分鐘。  

  3. 棄固定液，PBS漂洗3次（5分鐘/次）。  

- 原代神經(jīng)元培養(yǎng)：  

  1. 棄培養(yǎng)基，PBS輕柔沖洗細(xì)胞2次。  

  2. 加入預(yù)冷4%多聚甲醛固定液，室溫固定15分鐘。  

 2. 染色流程  

1. 固定：  

   - 棄PBS，加入固定液（100μL/樣本），室溫孵育15分鐘。  

   - 棄固定液，PBS漂洗3次（5分鐘/次）。  

2. 染色液A處理：  

   - 加入染色液A（100μL/樣本），避光孵育45分鐘（室溫）。  

   - 棄染色液A，PBS漂洗3次（5分鐘/次）。  

3. 染色液B處理：  

   - 加入染色液B（100μL/樣本），避光孵育10分鐘（室溫）。  

   - 棄染色液B，PBS漂洗3次（5分鐘/次）。  

4. 顯色：  

   - 加入顯色底物（50μL/樣本），避光孵育10分鐘（室溫）。  

   - 棄顯色液，PBS漂洗3次（5分鐘/次）。  

5. 封片：  

   - 滴加封片劑（50μL/樣本），蓋上蓋玻片，室溫固化1小時(shí)。  

 3. 顯微鏡觀察  

- 使用普通光學(xué)顯微鏡（400×放大倍數(shù)）觀察高爾基體結(jié)構(gòu)。  

- 典型染色結(jié)果：高爾基體呈黑色顆粒狀，突觸結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)。  

 五、注意事項(xiàng)  

1. 操作安全：  

   - 染色液A含銀鹽，避免直接接觸皮膚或吸入氣溶膠。  

   - 實(shí)驗(yàn)全程需佩戴手套及護(hù)目鏡，建議在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)操作。  

2. 樣本處理：  

   - 組織切片厚度需嚴(yán)格控制在50-100μm，過(guò)厚會(huì)導(dǎo)致染色不均。  

   - 固定時(shí)間不可超過(guò)20分鐘，否則影響染色特異性。  

3. 試劑保存：  

   - 染色液B需避光保存，開(kāi)封后建議分裝冷凍以延長(zhǎng)有效期。  

4. 質(zhì)量控制：  

   - 每批次試劑附帶陽(yáng)性對(duì)照樣本（含已知高爾基體密度的細(xì)胞系），用于驗(yàn)證染色效果。  

 六、應(yīng)用場(chǎng)景  

1. 神經(jīng)退行性疾病研究：  

   - 檢測(cè)阿爾茨海默病、帕金森病模型中神經(jīng)元高爾基體碎裂程度，評(píng)估疾病進(jìn)展。  

2. 藥物篩選：  

   - 評(píng)估化合物對(duì)神經(jīng)元分泌功能的影響（如鋰鹽對(duì)雙相情感障礙模型的療效）。  

3. 發(fā)育生物學(xué)：  

   - 觀察胚胎期神經(jīng)元遷移過(guò)程中高爾基體動(dòng)態(tài)變化，揭示神經(jīng)發(fā)育機(jī)制。  

4. 環(huán)境毒理學(xué)：  

   - 分析重金屬暴露對(duì)神經(jīng)元高爾基體超微結(jié)構(gòu)的損傷，評(píng)估環(huán)境毒素風(fēng)險(xiǎn)。  

 七、技術(shù)優(yōu)勢(shì)對(duì)比  

傳統(tǒng)高爾基染色法與Rapid GolgiStain™ Kit的核心差異如下：  

- 染色時(shí)間：傳統(tǒng)方法需6-8小時(shí)，本試劑盒僅需1.5-2小時(shí)。  

- 樣本兼容性：傳統(tǒng)方法僅限冷凍切片，本試劑盒支持腦切片、培養(yǎng)細(xì)胞及活體組織。  

- 信號(hào)穩(wěn)定性：傳統(tǒng)染色結(jié)果1周內(nèi)褪色，本試劑盒染色結(jié)果6個(gè)月無(wú)褪色。  

- 操作復(fù)雜度：傳統(tǒng)方法需多步手工操作，本試劑盒提供標(biāo)準(zhǔn)化流程。  

- 成本效益：傳統(tǒng)試劑種類繁多，本試劑盒一體化設(shè)計(jì)降低成本。  

 八、常見(jiàn)問(wèn)題解答  

Q1：染色后高爾基體信號(hào)弱怎么辦？  

- 可能原因：固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或樣本脫片。  

- 解決方案：縮短固定時(shí)間至15分鐘內(nèi)，使用多聚賴氨酸預(yù)處理載玻片增強(qiáng)細(xì)胞貼壁。  

Q2：背景染色過(guò)高如何解決？  

- 可能原因：洗滌不夠或顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。  

- 解決方案：增加PBS漂洗次數(shù)至5次，嚴(yán)格控制顯色時(shí)間（≤15分鐘）。  

Q3：封片后出現(xiàn)氣泡如何處理？  

- 建議：使用移液槍輕吹封片劑表面，或延長(zhǎng)封片固化時(shí)間至2小時(shí)。  

 九、供應(yīng)信息

供貨商：上海起發(fā)

 十、儲(chǔ)存與運(yùn)輸  

- 儲(chǔ)存條件：  

  - 試劑：2-8℃避光保存，避免冷凍。  

  - 封片劑：-20℃冷凍保存，運(yùn)輸時(shí)需使用干冰。  

- 運(yùn)輸時(shí)效：  

  - 國(guó)內(nèi)訂單：3個(gè)工作日內(nèi)送達(dá)（順豐冷鏈）。  

  - 國(guó)際訂單：7-10個(gè)工作日（DHL國(guó)際快遞）。  

 十一、環(huán)保與安全  

- 廢棄物處理：  

  - 含銀廢液需按《危險(xiǎn)廢物名錄》分類收集，交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理。  

  - 廢棄試劑瓶使用后需清洗，避免殘留污染。  

- 生物安全：  

  - 操作活體樣本時(shí)需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，遵循BSL-2級(jí)防護(hù)標(biāo)準(zhǔn)。  

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（注：本文內(nèi)容基于品牌公開(kāi)資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準(zhǔn)。）